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本产品是收集生长在对数期的BL21(DE3)菌，加入含有甘油的细菌冻存液制备而成。可以直接划平板或小量、大量培养。本菌株适用于T7启动子调控目的基因表达的pET系列等原核表达质粒。本菌株可以使用常规的LB培养基或SOC培养基进行培养。

BL21缺失细胞质中的Lon蛋白酶和胞外膜上的OmpT蛋白酶，能有效避免重组表达蛋白的降解，所以被广泛用作外源蛋白的表达菌株。

BL21(DE3)是BL21被λ噬菌体DE3溶原化的衍生菌株，在lacUV5启动子控制下可表达噬菌体T7 RNA聚合酶(相关基因序列已经整合到细菌染色体中)。IPTG可以诱导BL21(DE3)菌株中T7 RNA聚合酶的高表达，因此BL21(DE3)菌株适合受T7启动子调控的目的基因通过IPTG诱导表达。常见的pET系列原核表达载体中目的基因的表达都是受T7启动子调控的，因此都适合用BL21(DE3)作为宿主菌。

BL21(DE3)菌株核酸酶表达水平较高，在利用其进行被转化质粒提取时，为充分避免核酸酶的影响，可使用通用型质粒小量提取试剂盒(3mL，货号：YTB4001)、通用型质粒中量提取试剂盒(9mL，货号：YTB4002)或通用型质粒大量抽提试剂盒(100mL，货号：YTB4003)进行质粒抽提。

• 使用本甘油菌时可以不必完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加细菌的活力会逐渐下降。在没有结冻的情况下，菌体会逐渐沉淀至管底，请务必注意适当混匀后使用。
  
• 为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板然后再挑单克隆菌落进行后续操作。
  
• 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 划平板接种：
  取出BL21(DE3)甘油菌置于冰上，并置于超净台内，后续操作都在超净台内操作。
  
  • 用镊子和塑料枪头操作：镊子的顶端在70%酒精中蘸一下，并且在酒精灯上略略烧一下，使镊子的顶端处于无菌状态。用镊子夹取一个无菌的200μL塑料枪头，蘸取少量BL21(DE3)甘油菌，然后把蘸有菌液的塑料枪头，以尽量和LB平板接近平行的角度，在不含抗生素的LB平板上连续作S形或Z形划动，再用一无菌的200μL塑料枪头，在原先的划线上以90o或120o角，再在LB平板上连续作S形或Z形划动。通常换枪头重复操作2～3次即可。37℃倒置培养过夜。
    
  • 用接种环操作：将接种环在酒精灯上略略烧一下，使接种环处于无菌状态。微冷后，蘸取少量BL21(DE3)甘油菌，在不含抗生素的LB平板上连续作S形或Z形划动。把接种环再烧一下，微冷后，在原先的划线上以90o或120o角，再在LB平板上连续作S形或Z形划动。通常用接种环重复操作2～3次即可。37℃倒置培养过夜。
• 直接培养：
  BL21(DE3)甘油菌置于冰上，并置于超净台内，后续操作都在超净台内操作。把镊子的顶端在70%酒精中蘸一下，并且在酒精灯上略略烧一下，使镊子的顶端处于无菌状态。用镊子夹取一个无菌的塑料枪头或牙签，蘸取少量BL21(DE3)甘油菌，然后把蘸有菌液的塑料枪头或牙签放到装有3mL LB的细菌培养试管内或装有100mL或更大体积LB的细菌培养瓶内。37℃，约200rpm培养过夜。
  
• 感受态细菌的制备
  可以使用感受态细胞快速制备试剂盒(货号：YT022)、高效感受态细胞制备试剂盒(货号：YT023)或其它方法进行感受态细胞。